常见问题解答
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Q:
加入模板DNA的最低浓度是多少？是否DNA模板加入量和蛋白表达效率相关？
A:模板DNA浓度低于4 ng/μl，会降低表达量。模板DNA加入量和蛋白表达量有关，建议根据蛋白优化，一般8 ng/μl左右就可以。
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Q:
相同模板的蛋白表达量组间差和批间差是否稳定，是否有相关数据？
A:相同模板的蛋白表达量组间差和批次差相对稳定，偏差约10%~20%左右。
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Q:
无细胞表达与传统大肠杆菌表达的区别是什么？
A:对比项
无细胞表达系统
传统细胞表达系统
定义
无细胞蛋白表达属于体外反应系统，无需完整活细胞，直接利用细胞提取物（含核糖体、酶、tRNA、氨基酸等翻译所需成分），在体外环境中完成转录和翻译。
传统大肠杆菌表达依赖活的大肠杆菌细胞，通过将目的基因导入细胞，利用细胞自身的转录、翻译机制（体内环境）合成蛋白。
实验流程
模版制备→无细胞反应
质粒构建→转化大肠杆菌→筛选阳性克隆→扩大培养→诱导表达→收集细胞→裂解纯化
耗费时间
1~2 h 即可表达出目的蛋白，8~16 h 即可达到最大量
时间数天到数周
特殊蛋白表达
可表达各种类型的蛋白，包括毒性蛋白、富含二硫键蛋白
或难溶蛋白
毒性蛋白、富含二硫键蛋白或难溶蛋白表达困难
操作便捷性
简单快捷，开盖即用，仅需加入 DNA 或 RNA 模板
对实验条件和操作技能要求高
应用灵活性
可使用 96 孔板或离心管进行反应，高通量筛选；修饰等更灵活
难以实现高通量表达和筛选
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Q:
合成的蛋白质可以使用哪些方法纯化？
A:可以使用镍磁珠纯化。
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Q:
是否需要在合成前纯化质粒或线性 DNA 模板？
A:说明DNA的质量对无细胞很关键，可以使用高品质的质粒小量制备试剂盒或 PCR 和 DNA 纯化试剂盒。
