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干货分享 | 你购买的Taq酶抗体好用么？

发布时间：2024-03-13 发布人：

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众所周知，利用Taq酶抗体实现热启动PCR是抑制非特异性扩增的重要手段。Taq酶抗体在低温下（一般<50℃）能够封闭Taq酶的活性，而在PCR反应温度下与Taq酶解离并释放其活性，从而避免低温时产生的非特异性扩增。

现有荧光定量PCR试剂中，Taq酶抗体的成本占到总成本的60%以上。但是小伙伴们是否发现，从市场上购买的Taq酶抗体往往对自己的Taq酶封闭效果并不理想，这是什么原因呢？

免疫学上，抗原上与抗体结合的位点称为抗原表位，往往只包含几个氨基酸残基。如果所使用的Taq酶是突变体，而突变位点恰好位于某个抗原表位上，那么针对野生型Taq酶筛选的抗体与这种突变体的亲和力就有可能下降。

针对这种问题，愚公生物&百时美研发团队经过长期努力，成功构建了包含多种Taq酶抗体的抗体库。与常规抗体库相比，愚公抗体库有三点显著优势：

1. 可针对不同Taq酶突变体进行封闭，组合使用可达到更优效果；

2. 包含针对外切酶结构域的抗体；

3. 纯度高，批间一致性好。

一、可封闭不同Taq酶突变体，组合使用效果更佳

实际应用中，已经出现了针对不同需求（如提高扩增速率、增强抑制剂耐受性等）的多种Taq酶突变体。愚公选取了公开发表文献中的6种Taq酶突变体进行测试，发现不同抗体对不同Taq酶突变体的亲和力有显著差异。

因此，愚公生物&百时美构建了包含多种抗体的抗体库，以满足用户对不同Taq酶突变体的需求。

我们在野生型Taq酶上发现了至少5个抗原表位，不同抗体对同一种Taq酶的结合表位也不尽相同。利用该性质，组合使用不同抗体可达到最大的封闭效果。

针对野生型Taq酶，分别使用A3、A7、A3/A7混合抗体按照摩尔比抗体:Taq=2:1孵育得到热启动Taq酶，并测试其活性，结果如下图：

荧光值越高表示Taq酶残留活性越高。结果显示40 U的热启动Taq酶活性＜0.2 U Taq，代表40 U Taq酶被封闭了超过39.8 U的活性，则封闭性＞39.8/40=99.5%。

在抗体与Taq酶摩尔比不变的情况下，使用A3/A7混合抗体对Taq酶的封闭效率远大于单独的A3或A7抗体，在37℃下几乎完全封闭了Taq酶活性。

愚公生物&百时美Taq酶抗体在正常PCR的95℃，30 s预变性过程中即可充分解封闭，且升温过程中无非特异性扩增，无需额外改变反应程序。

二、可封闭外切酶活性的抗体

Taq酶除具有DNA聚合酶结构域外，还具有5’-3’外切酶结构域。在Taqman探针法检测中。如果仅封闭聚合酶结构域，外切酶结构域仍可能降解一部分探针，产生假阳性结果。

我们经过潜心筛选，获得了能够高效封闭Taq酶外切酶活性的单克隆抗体，测试结果如下：

该抗体对Taq外切酶活性封闭率＞95%。

三、生产工艺先进，质量稳定可靠

▶ 纯度高

经SEC-HPLC检测，抗体纯度＞99%

▶ 无污染

愚公生物&百时美还确保抗体无核酸酶残留、无内毒素、无宿主核酸。

内毒素：＜1 EU/mg

宿主DNA：＜1 copy/μg

▶ 稳定性高

将抗体在37℃下存放不同时间后，再与Taq酶混合后进行qPCR，结果均无显著性差异。

▶批间一致性好

3个批次的Taq antibody，与Taq酶孵育后检测，封闭比例均＞99.5%，结果无显著差异。

四、相关产品

愚公生物&百时美可以根据客户提供的Taq酶突变体，定制筛选最合适的抗体。

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