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新品上市 l 热敏UDG/UNG

发布时间:2022-08-09 发布人:
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热敏UDG/UNG——高效去除扩增产物气溶胶污染

  在核酸检测、司法鉴定、食品检测等分子诊断实验室中,经常使用PCR或环介导等温扩增 (LAMP) 等技术大量扩增同类样品,由扩增产物散逸形成的气溶胶所导致的PCR假阳性问题带来很大困扰。使用尿嘧啶-DNA糖基化酶 (Uracil-DNA Glycocasylase) 去除扩增产物气溶胶污染是目前较为安全和有效的方法。

 

UDG作用原理

  尿嘧啶-DNA糖基化酶 (Uracil-DNA Glycocasylase),简称UDG或UNG。该酶特异性识别单链或双链DNA链上的尿嘧啶碱基 (dU),对RNA无活性,对待检测的不含尿嘧啶碱基的DNA无影响。因此,在DNA扩增反应体系中加入UDG,可有效防止外来扩增产物的污染。具体原理如下:

  在DNA扩增反应底物dNTPs中掺入dUTP,扩增的DNA产物中即含有dU。如果反应体系被含有dU的外来扩增产物气溶胶污染,在扩增反应之前,UDG可在常温下催化水解外来DNA链中的尿嘧啶碱基和脱氧核糖骨架之间的N-糖苷键,产生缺碱基 (AP) 位点,然后将UDG失活。在随后扩增反应的高温下,含有AP位点的DNA骨架水解断裂,从而降解了外来扩增产物。而本次新加入的反应模板不含dU,不受UDG影响。

愚公百时美——热敏UDG

  使用UDG降解外来扩增产物后,在扩增前必须将UDG失活,否则会降解本次扩增产物,影响扩增结果。目前市场上普通UDG产品来源于大肠杆菌等,热稳定性高,95℃孵育10 min仍可能有残留活性(数据来源NEB),对后续PCR有潜在影响,更不能用于一步法RT-qPCR和LAMP。
  愚公生物/百时美新近推出的热敏UDG (HL-UDG) 来源于冷水生物,对温度较为敏感,50℃下孵育5min即可完全失活,解决了常规UDG难以热失活的问题,并且可用于一步法RT-qPCR和LAMP。

产品特性:
1、50℃下彻底不可逆的失活。
2、保持PCR产物的完整性。
3、适用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、LAMP污染控制。

 

性能展示:

 1、 热敏感,50℃彻底不可逆失活  

图1  HL-UDG 在50℃下彻底不可逆失活。A:将1 U的HL-UDG分别在50℃、70℃、95℃条件下孵育10min后与含dU底物25℃下反应。消化的底物电泳条带无明显变化。B:该酶50℃ 下5min、10min失活后的荧光值均与不加UDG的荧光值接近。

 

 2、 保持PCR产物的完整性  

 

图2  HL-UDG不影响PCR产物的完整性。A:在PCR体系中加HL-UDG,在37℃下孵育0、1、2、4、6、8h,凝胶电泳结果显示加或不加HL-UDG,PCR产物条带无明显变化。B:在PCR体系中加HL-UDG,37℃下孵育8h的PCR产物测序结果显示序列完整。

 

3、 兼容qPCR体系&消化彻底  

图3  HL-UDG兼容qPCR体系&消化彻底。A:在模板为不含有dUTP的qPCR体系加入HL-UDG 与不加入的扩增效果一致。B:qPCR体系中加入不同浓度的含dU模板均被彻底消化,不起峰。

 

应用场景:

1、 控制PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、LAMP中的扩增产物气溶胶污染。

2、DNA 修复和突变检测研究。

3、提升 PCR 产物的克隆效率。

4、提升定点突变的效率。

5、蛋白-DNA 相互作用研究。

 

订购信息:

 

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