新品上市 l 热敏UDG/UNG
热敏UDG/UNG——高效去除扩增产物气溶胶污染
在核酸检测、司法鉴定、食品检测等分子诊断实验室中,经常使用PCR或环介导等温扩增 (LAMP) 等技术大量扩增同类样品,由扩增产物散逸形成的气溶胶所导致的PCR假阳性问题带来很大困扰。使用尿嘧啶-DNA糖基化酶 (Uracil-DNA Glycocasylase) 去除扩增产物气溶胶污染是目前较为安全和有效的方法。
UDG作用原理
在DNA扩增反应底物dNTPs中掺入dUTP,扩增的DNA产物中即含有dU。如果反应体系被含有dU的外来扩增产物气溶胶污染,在扩增反应之前,UDG可在常温下催化水解外来DNA链中的尿嘧啶碱基和脱氧核糖骨架之间的N-糖苷键,产生缺碱基 (AP) 位点,然后将UDG失活。在随后扩增反应的高温下,含有AP位点的DNA骨架水解断裂,从而降解了外来扩增产物。而本次新加入的反应模板不含dU,不受UDG影响。
愚公百时美——热敏UDG
性能展示:
图1 HL-UDG 在50℃下彻底不可逆失活。A:将1 U的HL-UDG分别在50℃、70℃、95℃条件下孵育10min后与含dU底物25℃下反应。消化的底物电泳条带无明显变化。B:该酶50℃ 下5min、10min失活后的荧光值均与不加UDG的荧光值接近。
2、 保持PCR产物的完整性
图2 HL-UDG不影响PCR产物的完整性。A:在PCR体系中加HL-UDG,在37℃下孵育0、1、2、4、6、8h,凝胶电泳结果显示加或不加HL-UDG,PCR产物条带无明显变化。B:在PCR体系中加HL-UDG,37℃下孵育8h的PCR产物测序结果显示序列完整。
3、 兼容qPCR体系&消化彻底
图3 HL-UDG兼容qPCR体系&消化彻底。A:在模板为不含有dUTP的qPCR体系加入HL-UDG 与不加入的扩增效果一致。B:qPCR体系中加入不同浓度的含dU模板均被彻底消化,不起峰。
1、 控制PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、LAMP中的扩增产物气溶胶污染。
2、DNA 修复和突变检测研究。
3、提升 PCR 产物的克隆效率。
4、提升定点突变的效率。
5、蛋白-DNA 相互作用研究。