反应结束后可以选择性加入蛋白酶抑制剂后暂存-20度保存，长时间保存需-80度保存；产物需避免反复冻融，如需多次冻融建议分装保存。

1.试剂盒可能失活，将无细胞蛋白表达反应组分置于-80℃储存。为避免反复冻融，可根据反应用量，将A液和B液分别分装后用液氮速冻后再置于-80℃储存。
2. 核酸酶污染，实验操作过程中请戴上手套和口罩，并使用不含核酸酶的水、枪头以及离心管。

1. DNA模板制备影响，DNA模板制备过程中，需注意去除乙醇、RNase，推荐使用柱纯化法纯化DNA，最后洗脱步骤使用RNase-free的ddH2O；PCR制备的模板需注意是否有非特异性扩增，非特异性扩增影响表达产量。
2. DNA模板添加量影响，DNA模板需精确定量，并考虑对添加量进行优化。
3. 基因结构影响，确保目的基因上下游序列按照要求设计。
4. DNA序列影响，确保序列阅读框没有移码；序列按照大肠杆菌密码子使用偏好进行密码子优化；添加或者更换融合标签种类与位置。

1. 折叠不正确，可以尝试使用较低温度（例如16℃）以及更长反应时间（例如24h）反应；或者选择添加折叠伴侣的Pro版和依赖二硫键折叠的Max版。
2. 表达的目的蛋白需要进行翻译后修饰，大肠杆菌无细胞表达是原核生物表达系统，不含翻译后修饰功能，需要确保所表达的蛋白翻译后修饰不影响蛋白活性。
3. 表达的目的蛋白需要辅因子才能具有完整的活性，可以尝试在反应过程中加入所需的辅助因子。

1. 折叠不正确，可以尝试使用较低温度（例如16℃）以及更长反应时间（例如24h）反应；或者选择添加折叠伴侣的Pro版和依赖二硫键折叠的Max版。
2. DNA序列影响，序列按照大肠杆菌密码子使用偏好进行密码子优化。
3. 蛋白序列可溶性差，尝试添加助溶标签提供可溶性或者不影响功能活性的情况下去掉蛋白疏水结构域。

1. 标签位置不对，尝试更换标签位置（例如N端换成C端）。
2. 标签与目的蛋白中间Linker过短，可以更换长柔性Linker序列。
3. DNA序列内部存在核糖体结合位点或者形成发夹结构，建议重新优化DNA序列。

膜蛋白表达可以选择Max版，反应体系需要筛选合适去垢剂以稳定蛋白。

CFPS-Control Plasmid II 为VHH（纳米抗体）表达配套的阳性对照质粒，同时可用作通用克隆载体骨架，带StepII标签与GFP11标签（基于分裂GFP (split-GFP)技术的荧光检测标签）。

通常，在表达异源蛋白时，N-糖基化共有位点保持不变。然而，蛋白质糖基化将是宿主细胞的典型特征，无论糖蛋白的来源如何。例如，在植物系统中表达的人类蛋白质将携带植物样聚糖（在规范共有天冬酰胺残基上）。O-糖基化也将由宿主的系统决定，但哪些残基获得这种修饰也可能发生变化。

可以，因为释放的游离寡糖上的还原端是完整的，这使得碳水化合物可以通过所选荧光基团的还原胺化进行标记。请注意，PNGaseF 是一种酰胺酶：在这种情况下，氨基会附着在聚糖的末端，但在 pH 值< 8.5 时极不稳定。游离寡糖释放后（在 pH 值为 7.5 的典型条件下），氨基立即丢失，留下自由还原端，用于还原胺化。