常见问题解答
-
Q:
F10：无细胞表达可以使用mRNA模板进行反应吗？
A:基于裂解液提取的无细胞表达不适用直接使用mRNA模板进行反应。
-
Q:
F11：大肠杆菌无细胞表达一定要用T7启动子吗？可以用其它启动子吗?
A:是的，必须用T7启动子；其它启动子效率低，不推荐使用。
-
Q:
F12：大肠杆菌无细胞可以表达多大分子量蛋白
A:一般可直接表达10~150kD分子量范围内蛋白。＜10kD蛋白需加融合标签（融合标签分子量建议≥10kD），后续可切除标签进行表达。
-
Q:
F13：无细胞反应过程需要摇晃吗？
A:为保证氧气的供给，无细胞反应可以放置在可控温的摇床或者振荡器中，转速可以设置为200~250 rmp。
-
Q:
F14：无细胞可以同时表达来自不同质粒的不同蛋白吗？
A:可以，单个反应中可以同时表达不同蛋白，但是产量相比单个蛋白表达可能会下降。
-
Q:
F15：无细胞表达反应结束后需要加多少纯化磁珠量？
A:一般可按照离心后上清体积与磁珠体积2：1体积比加入。
-
Q:
F16：无细胞表达允许的最小反应体积是多少？
A:测试最小反应体积为10μl，更小反应体积暂无数据。
-
Q:
F17：无细胞反应容器怎么选择？
A:为保证氧气的供给，一般选择反应容器与反应体积至少10：1以上体积比的容器。
-
Q:
F18：阳性对照sfGFP的蛋白分子量大概是多少？
A:约为33kD。
-
Q:
F19：无细胞表达反应产物如何检测？
A:产物可以进行SDS-PAGE电泳检测；若蛋白表达量低，可以根据目的蛋白的特性选择合适的检测方法，如Western blot、Elisa、融合荧光蛋白检测荧光强度以及产物不干扰下游实验的情况下进行功能测试等。
